我用的pDM4同源重组对细菌进行基因敲除。接合后用双抗平板筛出单交换菌株。然后20%蔗糖LB液体里面培养12小时后在20%蔗糖LB平板上划线,长出来的菌在氯霉素平板上也能长。这样一直筛不到氯霉素抗性消失的双交换菌株。有没有遇到过这种情况的友人能分享一下经验
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